Nola zehaztu kontzentrazio optimoa?
IPTG induzitzailearentzat (isopropil-beta-d-thiogalactoside), zenbat eta kontzentrazio handiagoa izan, orduan eta hobea.Kontzentrazio optimoa baldintza esperimental zehatzen eta nahi den indukzio efektuaren araberakoa da.
Orokorrean, IPTG-ren kontzentrazioa 0,1-1 mM bitartekoa erabiltzen da.Kontzentrazio baxuagoek zelulen hazkuntzan eragin kaltegarriak murrizten dituzte eta zitotoxikotasuna murriztu dezakete xede proteinen gehiegizko adierazpenaren ondorioz.Kontzentrazio altuagoek zelulen gehiegizko karga metabolikoa sor dezakete, eta zelulen hazkundea eta adierazpen eraginkortasuna eragin dezakete.
Kontzentrazio optimoa zehazteko modua xede-proteinaren adierazpen-maila ebaluatzea izan daiteke, kontzentrazio ezberdinetan IPTG indukzio-probak eginez.Eskala txikiko kultura-probak IPTG-ko kontzentrazio sorta bat erabiliz egin daitezke (adibidez, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etab.) eta kontzentrazio desberdinetako adierazpen-efektua ebaluatu daiteke xede-proteinaren adierazpen-maila detektatuz (adibidez, Mendebaldekoa). blot edo fluoreszentzia detekzioa).Emaitza esperimentalen arabera, adierazpen efektu onena duen kontzentrazioa hautatu da kontzentrazio optimo gisa.
Horrez gain, dagokion literaturara edo beste laborategi batzuen esperientziara ere jo dezakezu antzeko baldintza esperimentaletan erabili ohi den IPTG kontzentrazio-barrutia ulertzeko, eta, ondoren, behar esperimentalen arabera optimizatu eta doitzeko.
Garrantzitsua da kontzentrazio optimoa adierazpen-sistema desberdinen, xede-proteinen eta baldintza esperimentalen arabera alda daitekeela, beraz, hobe da kasuan-kasuan optimizatzea.
Argitalpenaren ordua: 2023-09-28