Ditiotreitola (DTT) gehien erabiltzen den agente erreduktore bat da, gehigarri berde berria bezala ere ezaguna.Konposatu organiko molekular txiki bat da, bi merkaptano talde dituena (-SH).Bere propietate murrizteko eta egonkortasunagatik, TDTa asko erabiltzen da biokimika eta biologia molekularreko esperimentuetan.
DTTren eginkizun nagusia proteinen eta beste biomolekula batzuen disulfuro-loturak murriztea da.Disulfuro-lotura proteina-tolestearen eta egonkortasunaren zati garrantzitsua da, baina zenbait baldintza esperimentaletan, hala nola SDS-PAGE analisi erreduzigarrian, proteinen birkonbinazioan eta tolestean, beharrezkoa da disulfuro-lotura bi tiol taldetara murriztea, egitura espaziala argitzeko. proteina.DTT-k disulfuro-loturekin erreakzionatu dezake merkaptano taldeetara murrizteko, eta horrela proteinaren egitura espaziala irekitzen da eta erraza da aztertzea eta manipulatzea.
DTT entzimen jarduera eta egonkortasuna babesteko ere erabil daiteke.Entzimak katalizatutako erreakzio batzuetan, oxidatzaileak entzimaren jarduera murriztu dezake.TDTak oxidatzaileekin erreakzionatu dezake substantzia kaltegarrietara murrizteko, eta horrela entzimaren jarduera eta egonkortasuna babesten ditu.
β-mercaptoethanol (β-ME) bezalako agente erreduktore tradizionalekin alderatuta, DTT agente erreduktore seguruagoa eta egonkorragotzat jotzen da.Disoluzio urtsuan egonkorra ez ezik, bere propietate murriztaileak ere mantentzen ditu tenperatura altuetan eta azido-base baldintzetan.
TDTa erabiltzea nahiko erraza da.Oro har, TDTa buffer egoki batean disolbatu eta gero sistema esperimentalera gehitzen da.DTT-ren kontzentrazio optimoa esperimentu zehatzaren arabera zehaztu behar da, eta, oro har, 0,1-1mM bitartekoa erabiltzen da.Kontzentrazio baxuagoek zelulen hazkuntzan eragin kaltegarriak murrizten dituzte eta zitotoxikotasuna murriztu dezakete xede proteinen gehiegizko adierazpenaren ondorioz.Kontzentrazio altuagoek zelulen gehiegizko karga metabolikoa sor dezakete, eta zelulen hazkundea eta adierazpen eraginkortasuna eragin dezakete.
Kontzentrazio optimoa zehazteko modua xede-proteinaren adierazpen-maila ebaluatzea izan daiteke, kontzentrazio ezberdinetan IPTG indukzio-probak eginez.Eskala txikiko kultura-probak IPTG-ko kontzentrazio sorta bat erabiliz egin daitezke (adibidez, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etab.) eta kontzentrazio desberdinetako adierazpen-efektua ebaluatu daiteke xede-proteinaren adierazpen-maila detektatuz (adibidez, Mendebaldekoa). blot edo fluoreszentzia detekzioa).Emaitza esperimentalen arabera, adierazpen efektu onena duen kontzentrazioa hautatu da kontzentrazio optimo gisa.
Horrez gain, dagokion literaturara edo beste laborategi batzuen esperientziara ere jo dezakezu antzeko baldintza esperimentaletan erabili ohi den IPTG kontzentrazio-barrutia ulertzeko, eta, ondoren, behar esperimentalen arabera optimizatu eta doitzeko.
Garrantzitsua da kontzentrazio optimoa adierazpen-sistema desberdinen, xede-proteinen eta baldintza esperimentalen arabera alda daitekeela, beraz, hobe da kasuan-kasuan optimizatzea.
Laburbilduz, DTT erabili ohi den agente erreduktore bat da, proteinen eta beste biomolekula batzuen disulfuro-loturak murrizteko eta entzimen jarduera eta egonkortasuna babesteko erabil daitekeena.Asko erabilia izan da biokimika eta biologia molekularreko esperimentuetan.
Argitalpenaren ordua: 2023-09-28