Ditiotreitola (DTT) erreduzitzaile erabilia da, gehigarri berde berria bezala ere ezagutzen dena. Bi merkaptano talde (-SH) dituen konposatu organiko molekular txiki bat da. Bere propietate erreduzitzaile eta egonkortasunagatik, DTT asko erabiltzen da biokimika eta biologia molekularreko esperimentuetan.
DTT-ren eginkizun nagusia proteinetan eta beste biomolekuletan disulfuro loturak murriztea da. Dissulfuro lotura proteinen tolesturaren eta egonkortasunaren zati garrantzitsua da, baina baldintza esperimental batzuetan, hala nola SDS-PAGE analisi murrizgarrian, proteinen birkonbinazioan eta tolesturetan, disulfuro lotura bi tiol taldetara murriztea beharrezkoa da proteinen egitura espaziala askatzeko. DTT-k disulfuro loturekin erreakzionatu dezake merkaptano taldeetara murrizteko, horrela proteinen egitura espaziala irekiz eta erraz aztertu eta manipulatuz.
DTT entzimen jarduera eta egonkortasuna babesteko ere erabil daiteke. Entzimek katalizatutako erreakzio batzuetan, oxidatzaileak entzimaren jarduera murriztu dezake. DTT-k oxidatzaileekin erreakziona dezake substantzia kaltegabeak bihurtzeko, eta horrela entzimaren jarduera eta egonkortasuna babesten ditu.
β-merkaptoetanola (β-ME) bezalako erreduzitzaile tradizionalen aldean, DTT erreduzitzaile seguruagoa eta egonkorragoa dela uste da. Ez da ur-disoluzioan egonkorra bakarrik, baizik eta bere erreduzitzaile propietateak mantentzen ditu tenperatura altuetan eta azido-base baldintzetan ere.
DTTren erabilera nahiko erraza da. Oro har, DTT buffer egoki batean disolbatzen da eta gero sistema esperimentalera gehitzen da. DTTren kontzentrazio optimoa esperimentu espezifikoaren arabera zehaztu behar da, eta normalean 0,1-1 mM-ko tartean erabiltzen da. Kontzentrazio txikiagoek zelulen hazkuntzan izandako eragin kaltegarriak murriztu ditzakete eta proteina diagnostikatuen gehiegizko adierazpenaren ondoriozko zitotoxikotasuna murriztu dezakete. Kontzentrazio handiagoek zelulen karga metaboliko gehiegizkoa eragin dezakete, zelulen hazkuntzan eta adierazpenaren eraginkortasunean eraginez.
Kontzentrazio optimoa zehazteko modua IPTG indukzio probak kontzentrazio desberdinetan eginez proteina helburuaren adierazpen maila ebaluatzea izan daiteke. Eskala txikiko kultura probak IPTG kontzentrazio sorta bat erabiliz egin daitezke (adibidez, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etab.) eta adierazpen efektua kontzentrazio desberdinetan ebaluatu daiteke proteina helburuaren adierazpen maila detektatuz (adibidez, Western blot edo fluoreszentzia detekzioa). Esperimentu emaitzen arabera, adierazpen efektu onena zuen kontzentrazioa hautatu zen kontzentrazio optimo gisa.
Horrez gain, literatura garrantzitsua edo beste laborategi batzuen esperientzia ere kontsulta dezakezu antzeko baldintza esperimentaletan ohikoa den IPTG kontzentrazio-tartea ulertzeko, eta ondoren optimizatu eta egokitu esperimentu-beharren arabera.
Garrantzitsua da kontuan izatea kontzentrazio optimoa alda daitekeela adierazpen-sistema, proteina helburu eta baldintza esperimental desberdinen arabera, beraz, hobe da kasuz kasu optimizatzea.
Laburbilduz, DTT erreduzitzaile erabilia da, proteinetan eta beste biomolekuletan disulfuro loturak murrizteko eta entzimen jarduera eta egonkortasuna babesteko erabil daitekeena. Oso erabilia izan da biokimika eta biologia molekularreko esperimentuetan.
Argitaratze data: 2023ko irailaren 28a