4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranosidoa CAS:200422-18-0

Efektua: ONPG substratu bat da, bereziki β-galaktosidasa entzimaren presentzia eta jarduera detektatzeko erabiltzen dena. β-galaktosidasa entzima presente eta aktibo dagoenean, ONPG bi produktutan banatzen du: o-nitrofenola eta galaktosa deribatu bat. O-nitrofenolaren askapenak kolore horia aldatzen du, eta hori espektrofotometro batekin neur daiteke.

Aplikazioa: ONPG-k hainbat aplikazio ditu biologia molekularrean eta biokimikan ikerketan:

β-galaktosidasa jardueraren zehaztapena: ONPG erabili ohi da β-galaktosidasa entzimaren jarduera neurtzeko eta kuantifikatzeko. O-nitrofenolaren eraketa-tasa, entzimaren jarduerarekiko zuzenean proportzionala dena, espektrofotometrikoki neur daiteke.

Geneen adierazpena eta erregulazioa: ONPG askotan erabiltzen da geneen adierazpenarekin eta erregulazio-azterketekin lotutako esperimentuetan. Maiz erabiltzen da fusio-proteinen analisietan, hala nola, ohikoa den lacZ fusio-sisteman, sustatzaile espezifikoen kontrolpean dauden geneen adierazpena aztertzeko. ONPG erabiliz neurtutako beta-galaktosidasa jarduerak geneen adierazpen-mailaren inguruko informazioa ematen du.

β-galaktosidasa jardueraren baheketa: ONPG DNA birkonbinatuaren teknologian erabil daiteke koloremetria bidezko baheketa-metodo gisa, β-galaktosidasa kodetzen duen LacZ genearen presentzia eta funtzionaltasuna identifikatzeko. Baheketa-metodo honek intereseko genea duten klonak identifikatzen laguntzen du.

Entzimen zinetika azterketak: ONPG ere erabilgarria da β-galaktosidasa entzimaren zinetika aztertzeko. Entzima-substratu erreakzio-abiadura substratu-kontzentrazio desberdinetan neurtuz, parametro zinetikoak zehaztu daitezke, hala nola Michaelis-Menten konstanteak (Km) eta erreakzio-abiadura maximoak (Vmax).