Gure inguruan heroi ezezagun asko daude, arruntak diruditenak, baina egia esan isilean asko laguntzen digute. Proteinasa K "heroi ezezaguna" da diagnostiko molekularraren industrian, nahiz eta industriako "handi eta boteretsuekin" alderatuta, proteinasa K hain da diskretua, ezen aspalditik ahaztu egin baitzaigu bere garrantzia. Koroaren epidemia berriaren agerraldiarekin, proteinasa K-ren eskaria izugarri handitu da, eta etxeko eta atzerriko hornidura kontsumoaren oso atzetik dago, eta denek bat-batean konturatu ziren proteinasa K hain garrantzitsua dela.
Zertarako balio du proteinasa K-k?
Proteinasa K serina proteasa bat da, entzima proteolitikoen jarduera duena, eta jarduera mantendu dezake ingurune askotan (pH (4-12.5), gatz handiko bufferra, 70 °C-ko tenperatura altua, etab.). Gainera, proteinasa K-ren jarduera ez dute SDS, urea, EDTA, guanidina hidrokloruroa, guanidina isotiozianatoa, etab. inhibitzen, eta detergente kantitate jakin batek ere proteinasa K-ren jarduera hobetu dezake. Tratamendu medikoan (birus eta mikrobioen desinfekzioa), elikagaietan (haragiaren samurtzea), larruan (ilea leuntzea), ardogintzan (alkoholaren argitzea), aminoazidoen prestaketan (luma degradatuak), azido nukleikoen erauzketan, in situ hibridazioan, etab., proteinasa K-k aplikazioak ditu. Aplikaziorik erabiliena azido nukleikoen erauzketa da.
Proteinasa K-k lagineko proteina mota guztiak entzimaliza ditzake, azido nukleikoei estuki lotuta dauden histonak barne, azido nukleikoak laginetik askatu eta erauzkinera askatu ahal izateko, erauzketa eta purifikazio hurrengo urratsa erraztuz. Birusen azido nukleikoa detektatzeko, proteinasa K birusen laginketa-soluzioaren osagai garrantzitsuenetako bat da. Proteinasa K-k birusaren estalki-proteina pitzatu eta inaktibatu dezake, eta hori seguruagoa da garraio eta detekzio fasean; gainera, proteinasa K-k RNasak ere degrada dezake, birusen RNAren degradazioa eragozten baitu eta azido nukleikoaren detekzioa errazten baitu.
Proteinasa K-ren gau bateko ospea
Ikerketa zientifikoaren arloan edo IVDren arloan izan, azido nukleikoaren erauzketa da esperimenturik oinarrizkoena, beraz, proteinasa K beti izan da oso garrantzitsua. Hala ere, iraganean, proteinasa K askoz ere gutxiago ezagutzen zen bere eginkizuna baino. Horren zati handi bat proteinasa K-ren eskaintzaren eta eskariaren arteko erlazioa oso egonkorra zelako gertatzen zen. Jende gutxik pentsatuko luke proteinasa K-ren eskaintza arazo bat izango zenik.
Koroa berriaren epidemia agertzearekin batera, azido nukleikoen probak egiteko eskaera izugarri handitu da. 2020ko ekainaren amaieran, Txinak ia 90 milioi koroa proba berri egin ditu, eta kopuru hori are kezkagarriagoa da mundu mailan. Azido nukleikoak erauzteko esperimentuetan, proteinasa K-ren lan-kontzentrazioa 50-200 μg/mL ingurukoa da. Oro har, 100 μg proteinasa K inguru behar dira azido nukleiko lagin bat ateratzeko. Benetako erabileran, azido nukleikoaren erauzketaren eraginkortasuna handitzeko, askotan Proteinasa K kantitate handiagoan erabiliko da. Koronabirus berriaren azido nukleikoak detektatzeak proteinasa K-ren eskaria handia ekarri du. Proteinasa K-ren jatorrizko eskaintzaren eta eskariaren oreka azkar hautsi zen, eta proteinasa K epidemia prebenitzeko material garrantzitsu bihurtu zen gau batetik bestera.
K proteinasa ekoizteko zailtasunak
Epidemiaren garapenarekin batera, jendeak proteinasa K-ren balio garrantzitsua baloratu badu ere, lotsagarria da proteinasa K-ren gehiegizko garrantzia dela eta, bertako enpresa gutxik parte hartu izana proteinasa K-ren ekoizpenean. Jendeak proteinasa K-ren ekoizpena ezarri nahi duenean Ekoizpen-prozesuan zehar, aurkitu zen proteinasa K proteina oso berezia dela. Oso zaila da proteinasa K-ren ekoizpen-ahalmena denbora gutxian handitzea.
Proteinasa K-ren ekoizpen eskala handian zailtasun hauek daude:
1. Adierazpen baxua
Proteinasa K-k proteina gehienak modu ez-espezifikoan degrada ditzake eta toxikotasun larria eragin dezake adierazpen-zelula ostalariarentzat. Beraz, proteinasa K-ren adierazpen-maila oso baxua da normalean. Proteinasa K asko adierazten duten adierazpen-sistemen eta anduien baheketak ziklo luzeagoa behar du normalean.
2. Pigmentu eta azido nukleikoen hondakinak
Eskala handiko hartzidurak pigmentu eta ostalariaren azido nukleiko hondar kopuru handia sartzen du. Zaila da ezpurutasun horiek kentzea arazketa-prozesu sinple batekin, eta arazketa konplexuak kostua handitzen du eta berreskuratze-tasa murrizten du.
3. Ezegonkortasuna
Proteinasa K ez da nahikoa egonkorra, bere burua entzimaliza dezake, eta zaila da 37 °C-tan denbora luzez egonkor gordetzea babes-agenterik gabe.
4. Erraz prezipitatzen da
Proteinasa K hauts izoztu-lehortua prestatzerakoan, hauts izoztu-lehortuan proteinasa K eduki solidoa handia dela ziurtatzeko, beharrezkoa da kontzentrazio handiko babes-agente izoztu-lehortua gehitzea, baina proteinasa K kontzentrazioa 20 mg/mL edo gehiagora iristen denean, erraza da agregazioak prezipitatu bat sortzea, eta horrek zailtasun handiak ekartzen ditu solido-eduki handiko proteinasa K izoztu-lehortzean.
5. Inbertsio handia
Proteinasa K-k proteasa-jarduera handia du eta beste proteasa batzuk hidroliza ditzake laborategian. Beraz, proteinasa K-k ekoizpen-eremu, ekipamendu eta langile espezializatuak behar ditu ikerketa, garapen eta ekoizpenerako.
XD BIOCHEM-en proteinasa K soluzioa
XD BIOCHEMek proteinen adierazpen eta purifikazio plataforma heldua du, eta esperientzia handia du proteina birkonbinatuen adierazpenean eta purifikazioan eta ekoizpen prozesuen optimizazioan. Ikerketa eta garapen talde baten eraketa azkarrari esker, proteinasa K-ren ekoizpen prozesu eskala handikoa gainditu da. Liofilizatu-lehortutako hautsaren hileko ekoizpena 30 KG baino gehiagokoa da. Produktuak errendimendu egonkorra du, entzima-jarduera espezifiko handia eta ez du ostalariaren zitokromo eta azido nukleiko hondarrik. Ongi etorri XD BIOCHEMekin harremanetan jartzera. Proba pakete bat eskuratu (E-posta:sales@xdbiochem.comTel.: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM-en irtenbide teknikoek honako hauek barne hartzen dituzte:
Plasmidoen integrazio anitzeko kopia erabiliz, 8g/L-ko adierazpen-maila duten adierazpen handiko anduiak hautatzen dira, eta horrek proteinasa K-ren adierazpen-maila baxuaren arazoa gainditzen du.
Urrats anitzeko purifikazio-prozesu bat ezarriz, proteinasa K-ren zitokromo eta azido nukleiko hondarrak balio estandarraren azpitik kendu ziren arrakastaz.
Babes-buffer formulazioen errendimendu handiko baheketaren bidez, 37 °C-tan proteinasa K egonkor gorde dezakeen buffer bat hautatu zen.
Bahetze-bufferrek proteinasa K kontzentrazio altuetan erraz agregatu eta prezipitatu daitekeen arazoa konpontzen dute, eta proteinasa K-ren solido-eduki handiko izozte-lehortzearen oinarriak ezartzen dituzte.
XD BIOCHEM proteinasa K lagina
XD BIOCHEM proteinasa K egonkortasun testa: ez da jardueran aldaketa nabarmenik egongo giro-tenperaturan 80 egun igaro ondoren
XD BIOCHEM proteinasa K egonkortasun testa: ez da jardueran aldaketa nabarmenik egongo giro-tenperaturan 80 egun igaro ondoren.
XD BIOCHEM proteinasa K-ren azido nukleikoen erauzketa-efektuaren eta lehiakide diren produktuen konparaketa. Azido nukleikoen erauzketa-prozesuan, XD BIOCHEM eta lehiakide den proteinasa K erabiltzen dira, hurrenez hurren. XD BIOCHEM proteinasa K-ren erauzketa-eraginkortasuna handiagoa da eta helburu-genearen Ct balioa txikiagoa.
Argitaratze data: 2021eko abenduaren 31a